一、实验步骤
1. 制备单细胞悬液
消化贴壁细胞 / 处理组织，充分吹打成单细胞。
40~70 μm 滤网过滤，去除团块（防止堵针）。
离心弃上清，用分选缓冲液重悬。
2. 细胞计数与浓度调整
浓度：1×10⁶~1×10⁷ /mL
体积：根据分选量一般 100~500 μL / 管
3. 设对照管（必须！）
每组必须设：
未染色细胞管（调电压）
单阳性对照管（调节补偿）
同型对照管（排除非特异性结合）
4. 抗体染色
细胞悬液中加入荧光抗体，避光孵育：
室温：20~30 min
或 4℃：30 min
加分选缓冲液洗涤，离心去上清。
重悬，再次过筛，上机。
5. 活死染色（可选）
上机前加入 7-AAD 或 PI，排除死细胞。
6. 上机分选
先跑未染色、单染管，调电压、调补偿。
圈选目的细胞群：
FSC/SSC 圈活细胞
去黏连、去碎片
根据荧光圈目标群
接收管预先加入完q培养基 / 血清（保护细胞）。
选择分选模式：
纯度优先（Purity）
富集模式（Enrich）
单细胞模式（Single cell）
7. 分选后处理
分选后离心，重悬培养 / 提取蛋白 / RNA。
可复检流式，检测分选纯度
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