番红-固绿染色(软骨)在涉及关节软骨及软骨下骨的形态学研究中,常需要联合使用多种染料以显示其组织学结构。其中,起源于上世纪60年代的番红O-固绿染色因可以直观反映关节软骨、软骨下骨和骨组织的结构而备受青睐。
软骨组织由软骨细胞和软骨基质组成,软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。软骨染色方法有很多种,例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O法等。番红O-固绿软骨染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色,嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而呈绿色或蓝色,与呈现红色的软骨对比鲜明,从而将软骨组织与骨组织区分开。通过图像分析软件可对番红O染色的软骨基质进行定量分析。
番红-固绿染色步骤:
(1)骨组织固定、脱钙,制成石蜡切片;
(2)切片常规脱蜡至水;
(3)入新鲜配制的Weigert染液染色;
(4)流水冲洗;
(5)酸性乙醇分化液分化;
(6)蒸馏水洗;
(7)在固绿染色液内浸染;
(8)蒸馏水洗;
(9)入番红O染液内浸染;
(10)蒸馏水洗;
(11)用乙酸溶液洗涤切片,以便去除残留的固绿,再用蒸馏水洗;
(12)分别用95%乙醇,无水乙醇脱水;
(13)二甲苯透明,中性树脂封固;
(14)镜检。
染色结果:软骨基质深红色,软骨细胞核蓝色,细胞浆、肌肉、胶原纤维及骨组织呈灰绿色。