线粒体膜电位(MMP)检测实验原理
线粒体在产生能量时会将电化学势能储存于线粒体内膜,在内膜两侧,若质子及其他离子浓度的不对称分布就会形成线粒体膜电位。
线粒体膜电位(MMP)检测服务介绍
大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关,其中线粒体跨膜电位(MMP)的下降,被认为是细胞凋亡级联反应过程中早发生的事件之一。它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体跨膜电位崩溃,则细胞凋亡不可逆转。
实验流程
1.细胞培养;
2.用适当的方法诱导细胞凋亡,同时设立阴性依照组合阳性对照组,收集细胞;
3.用PBS洗涤细胞三次,收集不多于1×106的细胞;
4.取100μL10×Incubation Buffer加900μL灭菌去离子水稀释成1×Incubation Buffer,混匀并预热至37℃;
5.吸取500μL 1×Incubation Buffer,加入1μL JC-1,涡旋混匀配成JC-1工作液;
6.取500μL JC-1工作液将细胞均匀悬浮,37℃,5% CO2的培养箱中孵育15~20min;
7.室温离心(2000rpm,5min)收集细胞,用1×Incubation Buffer洗两次;
8.吸取500 μL 10×Incubation Buffer重新悬浮细胞;
9.流式细胞仪检测,分析。