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ELISA检测实验服务

ELISA检测实验服务

简要描述:
酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA)是免疫学和分子生物学中广泛使用的实验室技术,由Eva Engvall和 Peter Perlmann 于1971年sc描述。该测定依赖于抗原-抗体相互作用的原理,并利用酶和比色检测来量化目标分子,主要用于检测和量化生物样品中特定蛋白质、肽、抗体或抗原的存在。ELISA测定通常应用于各个领域,包括临床

更新时间:2024-02-29

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厂商性质:其他

实验步骤

1. 样品准备

a. 细胞上清样品,需将培养瓶内的细胞消化离心取上清即可(如800g5分钟)。

b. 血清样品,将全血收集至不含抗凝剂的试管内,在室温下放置1小时,待全血自然凝固并析出血清后,4℃1500g离心10分钟,取黄色上清即得血清。

c. 血浆样品,将全血收集至含抗凝剂的试管内,混匀后置冰上,4℃1500g离心10分钟,取黄色或淡黄色上清即得血浆。

2. 确定样品测试组、标准品和空白组组所需的微孔条数量,每个浓度做两个平行重复,从支架上取出对应数量的微孔条,剩余储存在箔袋中,密封后在4℃储存。

3. 配制对应浓度的捕获抗体溶液、检测抗体溶液、包被液、洗涤液、样品稀释液、显色液、终止液、链霉亲和素-HRP(若使用试剂盒则没有此步骤或按试剂盒要求配制)。

4. 每孔加入100μL 捕获抗体溶液,用封板膜覆盖,4℃孵育过夜,过夜后舍弃舍板内溶液。

5. 每孔加入300-400μL洗涤液清洗五次,且最后一次置于厚吸水纸上拍干(若使用试剂盒则没有步骤45)。

6. 用样品稀释液按照1:5, 1:10, 1:50, 1:100, 1:1000, 1:2000稀释样品,以此确定样品IL-2的最佳检测浓度。

7. 配制梯度浓度的IL-2蛋白标准品,将工作浓度设置为1200pg/mL, 600pg/mL, 300pg/mL, 150pg/mL, 75pg/mL, 37.5pg/mL, 18.75pg/mL9.38pg/mL,以此浓度来绘制标准曲线。

8. 分别将样品、标准品、样品稀释液按照100μL/孔加入相应孔中作为标测试组、标准品组、空白组。

9. 将偶联sws的抗人IL-2抗体按照50μL/孔加入所有孔中,用封板膜覆盖,室温避光孵育2小时。

10. 每孔加入300-400μL洗涤液洗板五次,且最后一次置于厚吸水纸上拍干。

11. 在所有孔加入100μL稀释后的链霉亲和素-HRP,用封板膜覆盖,室温避光孵育1小时。

12. 每孔加入300-400μL洗涤液洗板五次,且最后一次置于厚吸水纸上拍干。

13. 在所有孔中加入100μL TMB显色液。用封板膜覆盖,室温避光孵育30min

14. 在所有孔中加入终止液50μL,混匀后立即测量A450值。

15. 计算每一组重复的标准品和样品的平均吸光度值。重复次数应在平均值的20%以内。

16. 绘制IL-2标准品标准曲线。以标准品浓度为横坐标,A450值为纵坐标,以平滑线连接各标准品的坐标点。通过样品的吸光度值和标准曲线计算出样品的相应浓度。


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