瑞氏-吉姆萨特殊染色
瑞氏色素是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料yajialan(Methylene Blue)组成的复合染料, 对原生质的染色有很好的区别作用。吉姆萨染液由天青2与伊红混合而成,染色原理和结果与瑞氏染色法基本相同,姬姆萨染色液对胞浆着色力较强,能较好的显示胞浆的嗜碱性程度,特别是对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒,着色清晰,但是对胞核着色偏深,核结构显色不佳,常与故姬姆萨染液常与瑞氏染液联合使用。
实验步骤
涂片制备:
取细胞悬液进行离心,弃去上清液。
加入适量PBS缓冲液,混匀后取适量滴于载玻片前端。
用推片呈30-40°角均匀用力向另一端平稳地推出,制备成细胞涂片。
将涂片放置自然晾干。
染色:
对于血涂片,可用组化笔沿着载玻片的边缘画一个大的长方形,以便后续观察。其他细胞涂片则无需此步骤。
滴加适量瑞氏染液,完quan覆盖细胞,染色1分钟。
用纯水冲洗组织上的染液,直至玻片流水呈无色。
滴加吉姆萨染色液,染色30秒(可用洗耳球轻轻吹打至染液完quan覆盖细胞)。
滴加瑞氏-吉姆萨C溶液(或D溶液),染色一定时间(根据实验需要调整)。
再次用纯水冲洗组织上的染液,直至玻片上流水呈无色。
观察与封片:
稍微甩下载玻片上多余的水份,用显微镜快速观察染色效果。
染色完成后,将涂片置于65℃烤箱烘烤4小时以上进行固定。
使用二甲苯进行透明处理,然后用中性树胶封片。
实验结果判读
在显微镜下观察,不同类型的细胞会呈现出不同的染色特征。例如:
红细胞数量多,体积小,无核,呈粉色或肉粉色。
嗜中性粒细胞体积略大于红细胞,细胞核呈紫蓝色分叶状,细胞质几乎无色。
嗜酸性粒细胞体积略大于嗜中性粒细胞,细胞核呈紫色,通常为2叶,细胞质充嗜酸性颗粒呈红色。
嗜碱性粒细胞体积略小于嗜酸性粒细胞,细胞质内有大小不等被染成紫色的嗜碱颗粒,核1-2叶,胞质染成淡蓝色。
淋巴细胞圆形,体积与红细胞相似,核致密染成深紫色。
单核细胞体积大,细胞质染成灰蓝色,核呈肾型或马蹄型染成紫蓝色。
注意事项
制作良好的涂片要求厚薄适宜,分布均匀,边沿整齐。
制作的涂片需要充分干燥以防脱片。
染色时间可根据染液浓度、室温高低、细胞多少来进行调节。
瑞氏-吉姆萨特殊染色经常用于血液和细胞涂片、骨髓细胞涂片、细菌染色。细胞质呈红色,细胞核及细菌呈蓝色,嗜酸性颗粒呈橘红色。染液中加中性甘油,防止甲醇挥发或氧化,同时也可使血细胞染色较清晰。