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    免疫荧光实验的要领你可记清楚了?

    发布时间: 2023-06-28  点击次数: 459次
      免疫荧光实验是一种广泛应用于生物医学研究领域的实验技术,它通过利用荧光标记的抗体来检测样本中特定蛋白质的存在和表达情况。原理基于抗体-抗原相互作用的特性。在该实验中,首先需要将待检测样品中含有的目标分子(如蛋白质)与对应的抗体进行结合,形成抗原-抗体复合物。然后,使用荧光标记的次级抗体与该复合物结合,从而标记出目标分子的存在位置和数量。
      免疫荧光实验的技巧:
      1、细胞准备。对单层生长细胞,在传代培养时,将细胞接种到预先放置有处理过的盖玻片的培养皿中,待细胞接近长成单层后取出盖玻片,PBS洗两次;对悬浮生长细胞,取对数生长细胞,用PBS离心洗涤(1000rpm,5min)2次,用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片。
      2、固定。根据需要选择适当的固定剂固定细胞。固定完毕后的细胞可置于含叠氮纳的PBS中4℃保存3个月。PBS洗涤3×5min.
      3、通透。使用交联剂(如多聚甲醛)固定后的细胞,一般需要在加入抗体孵育前,对细胞进行通透处理,以保证抗体能够到达抗原部位。选择通透剂应充分考虑抗原蛋白的性质。通透的时间一般在5-15min.通透后用PBS洗涤3×5min.
      4、封闭。使用封闭液对细胞进行封闭,时间一般为30min.
      5、一抗结合。室温孵育1h或者4℃过夜。PBST漂洗3次,每次冲洗5min.
      6、二抗结合。间接免疫荧光需要使用二抗。室温避光孵育1h.PBST漂洗3次,每次冲洗5min后,再用蒸馏水漂洗一次。
      7、封片及检测。滴加封片剂一滴,封片,荧光显微镜检查。