• 技术文章ARTICLE

    您当前的位置:首页 > 技术文章 > 成年小鼠关节软骨细胞原代培养

    成年小鼠关节软骨细胞原代培养

    发布时间: 2024-03-19  点击次数: 106次

     

     

    1. C57小鼠,8-10周,通过颈椎脱位处死浸入75%乙醇浸泡5分钟,转移到通风柜中的解剖盘中。

    2. 使用眼科剪和镊子,使髋关节脱臼,保持股骨头完整

    3. 用止血钳去除每个股骨头的软骨帽,将组织放入含2%双抗的PBS中。

    4. 用冰冷的含2%双抗的PBS清洗2-3遍,将关节软骨小心移到2ml离心管中。

    5. 用眼科剪刀将软骨帽剪成约1mm3的碎片,加入3ml预热的Collagenase D1.5mg/ml)。

    6. 放入37℃、80rpm的摇床中进行第一次消化,时间2h

    7. 第一次消化结束后,加入含血清的培养基终止消化,40um的细胞筛过滤后,离心1500rpm2min

    8. 沉淀用DMEM培养基重悬,计数,种植在24孔板中。

    9. 在未消化的组织中加入3ml预热的Collagenase D,放入37℃、80rpm的摇床中进行第二次消化,时间2h,然后收集细胞。