旷场动物实验又称敞箱实验，是行为学领域中一种广泛采用的测试方法，主要用于评估啮齿类实验动物（如小鼠、大鼠）在新异环境中的自主行为、探究行为与紧张度。其原理基于动物在新环境中的“探索-回避”矛盾行为。啮齿类动物天生具有趋壁性（嗜壁性），即倾向于紧贴墙壁以寻求安全感；同时，好奇心又驱使其探索开放区域。通过观察动物在旷场中的活动轨迹、停留时间等行为特征，可分析其对新环境的适应能力、焦虑状态及运动功能。
旷场动物实验是评估动物自发活动、探索行为及焦虑样行为的经典行为学实验，广泛应用于神经科学、药理学、心理学等领域。实验结果易受环境、操作、动物状态等多种因素影响，因此需严格遵循注意事项以保证数据的可靠性和可重复性。以下是关键注意事项：
一、实验环境准备
环境标准化
空间隔离：实验需在安静、避光（或光照强度恒定）、温度（22-25℃）和湿度（40%-60%）稳定的独立房间进行，避免外界噪音（如人员走动、设备声响）、光线变化（如窗户直射光）或气味干扰（如其他动物气味、消毒剂残留）。
旷场装置清洁：实验前需用75%酒精或中性清洁剂彻d擦拭旷场箱（包括底部和四壁），去除前一只动物留下的气味（如尿液、粪便），避免气味残留影响后续动物行为（如焦虑动物对陌生气味更敏感）。
光照控制：根据实验需求设定光照强度（通常50-300 lux），且需保证旷场内部光照均匀（避免角落阴影）。光照过强可能增加动物焦虑，过弱则可能降低活动量，需在预实验中确定适宜强度。
背景噪音：可设置恒定的白噪音（如50-60 dB）掩盖突发声响，减少环境波动对动物的干扰。
旷场装置参数统一
旷场箱的尺寸（如大鼠常用50×50×30 cm，小鼠常用40×40×30 cm）、材质（通常为灰色或黑色亚克力板，避免反光）、区域划分（如中心区与周边区的比例，通常中心区为1/3面积）需固定，且实验全程保持一致（不可中途更换装置）。
摄像头需正对旷场箱上方，确保完整拍摄动物活动轨迹，镜头高度和角度固定，避免因视野偏差导致轨迹分析误差。
二、动物准备与适应
动物饲养条件稳定
实验动物（如大鼠、小鼠）需在SPF级环境中饲养，自由摄食饮水，保持12h光暗循环（如7:00-19:00光照），实验时间固定在动物活跃期（如啮齿类通常在暗期活跃，可选择下午或夜间进行）。
避免实验前24h内对动物进行额外操作（如抓握、注射），减少应激对行为的影响。
实验前适应
环境适应：实验前1-3天，将动物饲养笼转移至实验房间，让其适应房间的温度、光照和气味（但不接触旷场装置），减少陌生环境导致的应激。
**Handling适应**：若实验人员需抓握动物，需在实验前3-5天每日轻柔抓握动物1-2分钟，让其适应人员操作，避免因恐惧导致活动异常。
三、实验操作规范
动物放置与计时
放置动物时，需轻柔将其放在旷场箱中心区（或统一位置，如某一角落），避免用力投掷或挤压动物，防止人为应激。
动物放入后立即撤离至观察室外（通过摄像头监控），避免人员在场干扰动物行为，同时启动计时（通常实验时长为5-10分钟，根据物种和实验目的调整）。
实验顺序与间隔
若涉及多组动物（如对照组、模型组、给药组），需采用随机顺序进行实验，避免因时间因素（如动物昼夜节律变化）导致组间偏差。
每组动物实验间隔需足够（至少5分钟），确保装置彻d清洁干燥，且下一只动物状态稳定。
异常情况处理
若动物在实验中出现攀爬箱壁、静止不动超过3分钟、排便排尿过多（可能因过度应激）等情况，需记录为异常数据，后续分析时考虑是否剔除（需在实验记录中注明原因）。
实验中若动物逃脱或装置故障，需终止该次实验，更换动物重新进行，并记录故障原因。
四、数据记录与分析
原始数据记录
除通过软件自动记录的指标（如总活动距离、中心区停留时间、站立次数）外，需手动记录动物的异常行为（如grooming梳理行为、粪便粒数）、实验环境参数（温度、光照、湿度）、动物状态（体重、健康状况）等，确保数据可追溯。
实验结束后，及时将动物放回原饲养笼，避免不同笼具动物混放。
软件与参数设置
行为学分析软件（如EthoVision、Noldus）的参数需提前校准（如区域划分、动物识别阈值），且全程保持一致，避免因参数调整导致数据偏差。
对软件自动识别的轨迹进行人工核查，修正因动物蜷缩、遮挡导致的识别错误。
五、伦理与动物福利
遵循3R原则
减少动物使用数量（通过预实验优化样本量），避免不必要的重复实验；实验过程中避免动物受到过度应激（如长时间处于旷场中），实验结束后若动物出现明显应激反应（如呼吸急促、颤抖），需单独饲养观察至恢复。
符合伦理规范
实验方案需经机构动物伦理委员会审批，操作人员需具备动物实验资质，避免因操作不当导致动物受伤（如抓握时导致动物骨折）。
六、实验后整理
装置清洁与维护
实验全部结束后，彻d清洁旷场箱，干燥后存放，避免残留污染物影响下次实验。
数据备份与存档
原始轨迹视频、软件导出数据、手动记录表格需及时备份（至少两份），按规范命名（如“日期-组别-动物编号-实验时长”），便于后续分析和溯源。
