实验操作流程:
1.转染试剂的准备
a.将400u去核酸酶水加入管中,震荡10秒钟,溶解脂状物。
b.震荡后将试剂放在- 20摄氏度保存,使用前还需需荡。
2。选择合适的混合比例(1: 1-1: 2脂质体[1体积: DNA质量来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的ONA,電荡后在加入合适体积的转染试剂,再次震荡。
3、将混合液在室温放置10-15分钟。
4、吸去培养板中的培养基,用PBS或者无血清培养基清洗一次。
5、加入混合液,将细胞放回培养箱中培养-个小时。
6.到时后,根据细胞种类决定是否移除混合液,之后加入*培养基继续培养24-48小时。
转染 ,是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入,转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例;化学介导方法很多,如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法,有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。
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