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    细胞培养服务为你带来细胞培养具体步骤和要求

    发布时间: 2022-05-30  点击次数: 234次
     
      细胞培养是指在体外模拟体内环境(无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等),使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养服务是伊莱博生物的基础服务项目之一。
      培养多种细胞并能在细胞内稳定或瞬时转染特定的受体或蛋白,耐药细胞株的构建。生长抑制及细胞毒实验细胞信号转导系统的生物化学研究:可提供包括G蛋白、cAMP、DAG、CREB、钙离子、MAPK传导通路等多种信号分子在内的信号转导研究技术支持。凋亡测定(caspases,annexinVandDNAfragmentation,线粒体膜电位的测定),细胞凋亡及周期测定(流式细胞术)与细胞侵袭转移相关的实验:黏附、转移和侵袭与细胞分化相关的实验细胞衰老实验
      细胞培养服务的细胞培养具体步骤和要求以及注意事项:
      一、复苏
      1、把冻存管从液氮中取出来,立即投入37℃水浴锅中,轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟),拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
      2、把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍,把粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。
      3、把上清液倒掉,加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动,使培养皿中的细胞均匀分布。
      4、标好细胞种类和日期、培养人名字等,放到CO2培养箱中培养,细胞贴壁后换培养基。
      5、3天换一次培养基。
      二、传代
      1、培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
      2、把原有培养基吸掉。
      3、加适当的胰蛋b酶(能覆盖细胞就行),消化1-2分钟。
      4、细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。
      5、用移液枪吹打细胞,把细胞都悬浮起来。
      6、把细胞吸到15ml的离心管中,1000转离心5分钟。
      7、倒掉上清液,加1-2ml培养基,把细胞都吹起来。
      8、根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般,癌细胞分5个,正常细胞传3个。继续培养。
      三、冻存
      把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来,分装到灭菌的冻存管中,静止几分钟,写明细胞种类,冻存日期。4℃30min,-20℃30min,-80℃过夜,然后放到液氮灌中保存。
      冻存液的配制:70%的*培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,边滴边摇。
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