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    免疫荧光实验为你讲述染色的方法

    发布时间: 2022-07-24  点击次数: 192次
     
      免疫荧光实验是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物,再用这种荧光抗体(或抗原)作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素,利用荧光显微镜观察标本,荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光(黄绿色或桔红色),可以看见荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原或抗体的性质、定位,以及利用定量技术测定含量。
      免疫荧光实验技术又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
      免疫荧光实验的染色方法:
      1、取出培养有细胞的盖玻片或glass-bottom培养皿,用0.01MPBS洗2-3遍。
      2、加入0.3%的Tritonx-100,37℃,30rain
      3、加入4%多聚甲醛试问固定30min或冷丙酮4℃固定10min。
      4、正常阻断血清1:20封闭试问20-30min,抑制IgG的非特异性结合。阻断血清选择与二抗同一种属的正常血清。
      5、去掉正常血清,直接加入一抗,37℃孵育1h或4℃过夜。抗体以0.01mo/LPBS稀释(理想的抗体浓度需经试验而定)。
      6、0.3%TritonX-100洗5min,0.01mol/IPBS洗5min,0.3%TritonX5min,0.01MPBS洗5rain。
      7、加入FITC-二抗或TRITC-二抗,37℃,孵育1h。
      8、0.3%TritonX-100洗5rain,0.01mol/LPBS洗5min,0.3%TritonX5min,0.01mol/LPBS洗5min,用滤纸吸干。
      9、90%甘油(PBS配制)封片。
      10、激光扫描共焦显微镜下观察,或于4℃避光保存。
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