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分子克隆与质粒载体构建

分子克隆与质粒载体构建

简要描述:
分子克隆与质粒载体构建:分子克隆是在分子水平上提供一种纯化和扩增特定DNA片段的方法。常含有目的基因,用体外重组方法将它们插入克隆载体,形成重组克隆载体,通过转化与转导的方式,引入适合的寄主体内得到复制与扩增,然后再从筛选的寄主细胞内分离提纯所需的克隆载体,可以得到插入DNA的许多拷贝,从而获得目的基因的扩增。

更新时间:2024-09-26

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厂商性质:其他

分子克隆与质粒载体构建


一、实验原理

分子克隆,又称DNA克隆,是指通过生物技术手段,将特定的DNA片段(基因)在体外进行复制和扩增,从而得到大量与其wanquan相同的DNA拷贝的过程。这一技术基于DNA的重组原理,主要步骤包括:

  1. 目的基因的获取‌:通过PCR扩增、基因文库筛选、化学合成等方法获取感兴趣的DNA片段(即目的基因)。

  2. 载体的选择‌:选择合适的载体分子,如质粒、病毒DNA等,用于携带和扩增目的基因。

  3. DNA连接‌:使用DNA连接酶将目的基因与载体DNA分子进行连接,形成重组DNA分子。

  4. 转化或转染‌:将重组DNA分子导入到宿主细胞(如细菌、酵母、哺乳动物细胞等)中,使其能够在细胞内复制和表达。

  5. 筛选与鉴定‌:通过特定的筛选方法(如抗生素抗性筛选、PCR鉴定、测序等)从大量细胞中筛选出含有重组DNA的细胞,并进行进一步的鉴定和验证。

质粒载体构建

质粒载体构建是分子克隆中的关键步骤之一,它涉及到将目的基因插入到质粒DNA中,形成重组质粒。质粒是一种小型环状DNA分子,广泛存在于细菌细胞中,能够自主复制并在细菌间传递。质粒载体构建的主要步骤包括:

  1. 目的片段的获取‌:通过PCR扩增、基因合成等方法获取目的DNA片段。

  2. 质粒载体的准备‌:选择合适的质粒载体,并通过适当的酶切处理暴露出黏性末端,以便于与目的片段连接。

  3. DNA连接‌:使用DNA连接酶将目的片段与质粒载体进行连接,形成重组质粒。

  4. 转化‌:将重组质粒导入到感受态细胞中(如大肠杆菌),通过热激、电穿孔等方法使质粒进入细胞。

  5. 筛选与鉴定‌:通过抗生素抗性筛选、PCR鉴定、测序等方法筛选出含有重组质粒的细胞,并进行进一步的鉴定和验证。

二、实验流程

目的DNA的扩增和纯化;

连接反应;

电泳检测连接产物。

三、客户提供

样本DNA,基因序列,试剂盒。

四、公司提供

构建好的载体,电泳胶图,测序结果。

实验周期:大约1-2月。

分子克隆与质粒载体构建


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