平板克隆实验
平板克隆实验形成项目介绍：当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，称为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞，大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力，各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变，通过计数克隆形成率可对单个细胞的增殖潜力做定量分析，了解细胞的增殖能力和独立生存能力。软琼脂培养或平板克隆是长用的方法。
一、实验步骤
1. 细胞接种
消化对数生长期细胞，制成单细胞悬液，计数。
按500~2000 个细胞 / 孔接种到 6 孔板中。
一般设：对照组、处理组，每组3 个复孔。
轻轻十字混匀，放入培养箱常规培养。
细胞密度根据细胞系调整：长得快、易克隆的种 500–1000；难克隆的 1000–2000。
2. 培养（关键）
继续培养 7~14 天，每 2~3 天换一次液。肉眼看到明显细胞克隆团时即可终止。
3. 终止培养
弃培养基，用PBS 轻轻洗 1~2 次。
4. 固定
加入4% 多聚甲醛或甲醇，固定 15~30 min。弃固定液，PBS 洗一遍。
5. 染色
加入0.1%~1% 结晶紫染液，室温染色 15~30 min。用清水缓慢洗掉多余染液，晾干。
6. 计数与计算
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