实验操作流程:
成骨诱导培养液配备与诱导操作:
1.准备含10%FBS的a-MEM培养液;
2在量好的EM培养波中添加5OuM抗坏血酸10mm微做甘油00m地塞米松;
3、准备6吼培养板，将P4细胞按照5*103个平方重米的规格接种于
始a-
EM培养液中;
4、待细胞长至基本融合后，
更换上述制备完成的成骨诱导培养液;
5、每三天换液一次，细胞长至7天时进行碱性研触朝杂色;
6、二十八天后再进行矿化结节的茜素红染色。
素红染色方法介绍:
1.去除细胞当前使用培养液，使用PBS清洗两次;
2使用10%甲醛室温固定15分钟，完成后使用重蒸倫水中洗两次;
3按照1ml风加入40mM的曹索红染色波，室温孵育20m并轻微擺荡;
4、清除掉没有*结合的染料，用重蒸馈水票洗并振荡5min重复4次;
5、倾斜放置2min吸取多余的重蒸温水:倒置昱微镇观察拍照记录。’
细胞成脂诱导培养液配备与诱导操作:
1、配置FBS10%含重的HG DMEM培养液;
2、在限制完成的C DMIE.解液中加入川地塞米松1u/m胰岛素，20时喉美辛和0 5mM BuXx，
3、准奋6孔培养板，将P4细胞按照2x104个平方厘米的规格接种于
票始HG-DMEM培养液中
小待细胞长至基本融合后，更换。上述制备完成的细胞成脂诱导培养波培养2天，
在用只含有10ug/m1胰岛素的成脂维持培养液培
养伏，如此交替循环培养至1天，使用红油0染色。
红油0染色方法介绍:
1、去除细胞使用的当前培养液，使用PBS清洗两次;
2、27 .5%甲醛室温固定20分钟;
3、重蒸演水清洗3此，空气中干燥;
4、加入0.5%的红油室温孵育- -小时;
5、配制70%乙醇溶液清洗3次;
6、倒置显微镜观察拍照记录。
