RT-PCR技术服务的核心步骤包括:
RNA提取:从组织或细胞等样本中提取RNA,确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。
反转录(RT):在反转录酶的作用下,以RNA为模板合成cDNA的第一链。这一步骤通常使用随机引物、Oligo dT或基因特异性引物中的一种。
PCR扩增:以cDNA为模板,在DNA聚合酶的作用下进行PCR扩增,得到目的片段。
RT-PCR技术服务的注意事项:
避免RNA酶污染:RNA酶会降解RNA,影响实验结果。因此,在操作过程中应使用RNA酶抑制剂,并确保所有器皿和试剂无RNA酶污染。
选择合适的引物:引物的选择对实验结果至关重要。应根据实验的具体情况选择合适的引物,如随机引物、Oligo dT或基因特异性引物。
控制反应条件:不同来源的逆转录酶反应温度有所不同,应根据所选逆转录酶的要求设置合适的反应条件。
RT-PCR技术服务的应用:
基因表达研究:通过检测细胞中特定基因mRNA的含量,可以评估该基因的表达水平。
病毒检测:RT-PCR技术可用于检测细胞中的RNA病毒,如SARS-CoV-2等。
基因克隆:通过RT-PCR技术可以直接克隆特定基因的cDNA序列,为后续的基因功能研究提供基础
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